搜索
搜索

用科技改善人類健康生活

產品
/
/
/
/
HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

科學研究試劑

高通量測序文庫構建試劑

藥物研發試劑

  • R223-說明書V20.1.pdf

    大?。?/span>
    2020-10-19 10:02:59
1/1
瀏覽量:
12661

HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

HiScript?IIQRTSuperMixforqPCR(+gDNAwiper)??預混液形式的兩步法RT-qPCR首選試劑(去基因組)?·基于高效的HiScript?IIReverseTranscriptase,逆轉錄效率更高·AnchoredOligo(dT)23?VN設計獨特,確保反應特異性,提高第一鏈cDNA合成效率和成功率·即用型的SuperMix預混液使用方便省時??gDNAwipe
價格:
1350.0
市場價
1350.0
瀏覽量:
12661
貨號:
R223-01
數量:
-
+
庫存:
9999
暫時無貨
1
產品詳情
FAQ
組分
說明書

HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

預混液形式的兩步法RT-qPCR 首選試劑(去基因組)

基于高效的HiScript® II Reverse Transcriptase,逆轉錄效率更高

Anchored Oligo (dT) 23  VN 設計獨特,確保反應特異性,提高第一鏈cDNA 合成效率和成功率

即用型的SuperMix 預混液使用方便省時

gDNA wiper Mix 可迅速徹底去除基因組污染

 

以HeLa 細胞RNA 為模板,使用Vazyme #R223 和Supplier Ta、Supplier Tg 同類產品,在各自說明書所提供的反應體系及反應條件下進行逆轉錄,然后用qPCR 檢測基因ACTB 和CBR3。結果表明與同類產品相比,Vazyme #R223 在擴增效率和擴增線性上表現都較優異。

本產品是以高性價比的HiScript® II Reverse Transcriptase 為基礎的兩步法qPCR 試劑盒。試劑盒中的4 × gDNA wiper Mix 可徹底去除殘留的基因組DNA 污染,保證后續定量結果更加可靠。5 × HiScript®II qRT SuperMix II 中含有逆轉錄反應所需的所有組分,加入模板RNA 和水即可迅速進行反應,同時終止gDNA wiper 作用,保證cDNA 的完整性。本產品針對qPCR 進行特別優化,逆轉錄產物兼容SYBR Green 和探針法qPCR,可以根據實驗目的,選擇相應的試劑配合使用,進行高性能的基因表達分析。

組分

R223-01 100 rxn (20 μl/rxn)

RNase free ddH2O

2×1 ml  

4 × gDNA wiper Mix

400 μl

5 × HiScript® II qRT SuperMix II a

400 μl

5 × No RT Control Mix b

40 μl

a.   包含Buffer、dNTP、HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix。

注意:與HiScript® II Q RT SuperMix  for qPCR (R222-01)中所帶的5 ×HiScript® II qRT SuperMix成分不同,不可以混用。

b.  除不含HiScript® II Reverse Transcriptase外,其余成分與5 ×HiScript® II qRT SuperMix II相同,用于配制No RT對照反應,排除基因組殘留。

-20℃保存

關鍵詞:
R223-01
預混液形式的兩步法RT-qPCR首選試劑(去基因組)
預混液形式的兩步法RT-qPCR首選試劑(去基因組)
未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:原核生物RNA能用我們的逆轉錄試劑嗎?

A1:可以。原核生物RNA沒有polyA尾,所以在逆轉錄反應體系中需要以Random primer作為逆轉錄引物。

Q2:逆轉錄試劑盒中帶有gDNA wiper Mix,可以去除殘留在RNA中的基因組。最多可以去除多少的基因組?但如果不進行基因組去除,會影響接下來的逆轉錄嗎?

A2:我們做過100ng基因組的測試,去除效率是99.95%。如果不進行基因組去除不會影響逆轉錄實驗的進行,但是如果基因組殘留嚴重但不去除的話,會影響接下來定量實驗的準確性。

Q3:延長逆轉錄時間,是否可以提高逆轉錄效率?

A3:對于大多數基因,延長逆轉錄時間對逆轉錄效率并沒有顯著提升;對于一些GC含量較高或含高級結構的模板,延長逆轉錄時間可提升逆轉錄效率。

Q4:做了No RT Control發現有gDNA殘留怎么辦?

A4:如果使用試劑盒中的gDNA wiper模塊進行gDNA去除,但No RT Control仍有CT值,可通過實驗組和No RT Control組的CT值來判斷實驗數據是否可用。當實驗組CT值與No RT Control對照組CT值差值大于5,說明由gDNA導致的誤差小于5%,則可以忽略gDNA污染;若實驗組與對照組CT值差值小于3或者幾乎一致,則實驗組擴增產物的模板很大一部分來源于gDNA,這樣的實驗組就失去定量意義。

Q5:如何評判RNA質量?

A5:RNA質量從兩個方面反應:

(1) RNA完整度。通過瓊脂糖凝膠電泳驗證RNA完整度。以真核生物為例,完整的總RNA有清晰的三條帶,分子量從大到小分別為28S、18S、5S,并且28S是18S亮度的兩倍;若能看見三條帶,但帶型模糊或彌散,則說明RNA有部分降解,此時請立即進行逆轉錄反應,并適量加大模板量;若只能看見分子量很小的一條帶或沒有條帶,則 RNA 已完全降解,需要重新提取。

(2) RNA的純度。RNA的純度可以通過OD260/280和OD260/230兩個比值是否在1.8-2.1范圍內進行判斷,蛋白、離子等殘留會使比值降低。

Q6:如何選擇逆轉錄的引物?

A6:根據實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT或基因特異性引物進行逆轉錄。

(1) 隨機引物:隨機結合在RNA的任何區域,適用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA類型的逆轉錄反應。

(2) Oligo dT:適用于具有PolyA尾的RNA(原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾)。 由于Oligo dT結合在PolyA尾上,所以對 RNA 樣品的質量要求較高,即使有少量的降解也會使全長cDNA合成量大大減少。

(3) 基因特異性引物:與模板序列互補,適用于序列已知的基因逆轉錄。

cDNA后續進行PCR擴增長片段,一般用Oligo dT或者基因特異性引物,不建議使用隨機引物,因為隨機引物是隨機結合的,cDNA片段會偏短,可能會對長片段擴增造成稀釋,后續擴增不出全長的目的基因;cDNA后續進行qPCR,一般使用Oligo dT和隨機引物的混合物,可以避免3’端和5’端的擴增偏好性。

Q7:可以通過測逆轉產物cDNA濃度判定逆轉效率嗎?

A7:不可以,逆轉錄產物cDNA是混合物,除了cDNA產物以外,還有buffer、逆轉錄酶、引物,同時還包含未轉錄的模板RNA,總RNA中的tRNA、rRNA等,都會干擾濃度測定結果,因此不能反應真實的cDNA產量。

這是描述信息
暫時沒有內容信息顯示
請先在網站后臺添加數據記錄。

友情鏈接  諾唯贊醫療 | 諾唯贊海外 | OA系統 | HR系統

品牌故事  Phanta | ClonExpress | Mut Express microRNA

產品
產品
產品
產品

售后服務  服務流程  |  訂購流程  |  真偽查詢

郵 箱     sales@vazyme.com (銷售咨詢)
      
support@vazyme.com (技術支持)
     
marketing@vazyme.com (市場推廣)

微信公眾號

掃碼關注

 地 址:江蘇省南京經濟技術開發區科創路紅楓科技園C2棟   電話:400-600-9335  網站建設:中企動力 南京

搜索
搜索
美女捕鱼达人 上海快3追号计划软件 九龙集团平码三中三 亿客隆网站多少 河南11选5中奖查询 白小姐旗袍正版图纸记录 vr赛车官网 bb视讯客户端 四川时时彩开奖结果查询 121期六肖中特 百家乐_Welcome 平码减几得下期平码 内蒙古时时彩开彩结果 DG百家 福彩3d走势图带连线专业版带坐标 十分快三彩票平台网 极速赛车计划分析图