ClonExpress Ultra One Step Cloning Kit
ClonExpress®Ultra One Step Cloning Kit
靈活多變的一體化超快速克隆試劑盒
快速：5 - 15min快速重組
簡單：一管式Mix，操作簡便
高效：高效克隆50 bp～10 kb片段，陽性率>95%
兼容：單片段、多片段、入門克隆三合一
零背景：提供零背景、氨芐/卡那雙抗性載體
提供在線引物設計：提供在線引物設計軟件CE Design
1.高度簡化的實驗流程
通過PCR擴增，使插入片段5’和3’最末端分別帶有和線性化載體兩末端一致的序列(15 - 20 bp)。用2×ClonExpress® Mix，50℃反應5-15 min，進行重組。重組產物直接轉化感受態細胞，平板上會形成數百個單克隆供陽性篩選。
2.優異的克隆效率
試劑盒能夠高效克隆50 bp-10 kb片段，不同長度單片段50 bp、2 kb、4.5 kb、7.5 kb、10 kb；多片段：四個片段（3 kb）、三個片段（10 kb）、五個片段（3 kb）、五個片段（6 kb），純化后分別與pCE-Zero vector進行同源重組，重組產物轉化化學感受態細胞DH5α（Vazyme #C502），菌落數如下圖所示。
試劑盒獨特的非連接酶依賴體系，無載體自連，克隆陽性率高達95%以上。重組產物轉化平板后，各挑取50個單克隆進行菌落PCR鑒定，不同長度插入片段陽性率如下圖所示。
3.廣泛的體系兼容性
試劑盒兼容1至5個片段同源重組，搭配Vazyme高保真酶，PCR產物可不經過純化直接進行克隆。重組產物轉化化學感受態細胞DH5α（Vazyme #C502），XL10（Vazyme #C503），Fast-T1（Vazyme #C505），得到較高克隆效率。
4.載體序列信息及測序方案
pCE-Zero vector載體，測序時使用通用測序引物（M13）即可。
ClonExpress® Ultra One Step Cloning Kit是新一代的重組克隆試劑盒，可快速高效的將1-5個片段定向克隆至任意載體的任意位點，高度優化的2×ClonExpress Mix，50℃反應5-15 min完成重組，操作簡單快捷。
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組分 |
C115-01(25 rxn) |
C115-02(50 rxn) |
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2 ×ClonExpress®Mix |
125 μl |
2 ×125 μl |
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pCE-Zero vector，linearized (50 ng/μl) * |
25 μl |
50 μl |
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500bp Control insert (20 ng/μl) |
5 μl |
5 μl |
*雙抗性載體：Amp+，Kan+
- 20℃保存。
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