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    2020-06-29 19:14:04
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Multiplex PCR Kit

MultiplexPCRKit特異性擴增可達19重多重性:檢測重數可達19重甚至更高。均一性:擴增穩定均一,靶點偏好性極低。適應性:廣泛兼容各種GC含量和長度的擴增子,隨酶附贈GCEnhancer。特異性:擴增緩沖高度優化,最大程度上抑制非特異性擴增。?靈敏性:使用基因組DNA作為模板,擴增靈敏度可達1ng。MultiplexPCRKit具有值得信賴的擴增能力和靈敏度,能在默認條件下高效完成絕大多
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貨號:
PM101-01/02/03
所屬分類
多重PCR
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29997
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組分
說明書

Multiplex PCR Kit

多重性:檢測重數可達19重甚至更高。

均一性:擴增穩定均一,靶點偏好性極低。

適應性:廣泛兼容各種GC含量和長度的擴增子,隨酶附贈GC Enhancer。

特異性:擴增緩沖高度優化,最大程度上抑制非特異性擴增。

靈敏性:使用基因組DNA作為模板,擴增靈敏度可達1 ng。

Multiplex PCR Kit具有值得信賴的擴增能力和靈敏度,能在默認條件下高效完成絕大多數多重擴增反應。如圖所示,以人基因組為模板進行19重檢測,擴增子長度范圍為70 bp-916 bp??梢?,在1 ng-500 ng的模板量范圍內Multiplex PCR Kit都可以均一的對各位點進行多重擴增。

M: 100 bp DNA Ladder

 

Multiplex PCR Kit具有優秀的片段長度兼容性。如圖所示,以小鼠基因組DNA為模板,擴增1.55 kb、1.07 kb、0.45 kb三個長度差異較大的目標位點??梢?,試劑盒能在單個反應體系中兼顧各種長度的擴增子。

1:三重PCR;2-4:單重PCR;5-7:兩重PCR。

M: DL5,000 DNA Marker

組分

PM101-01

PM101-02

PM101-03

Multiplex DNA Polymerase

50 μl

200 μl

 

PM101-02 × 5

2 × Multiplex Buffer

1.25 ml

4 × 1.25 ml

5 × Multiplex GC Enhancer

700 μl

4 × 700 μl

所有組分-20°C保存,有效期一年。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:PM101一次可以擴多少個片段?是否有5’-3’外切酶活性?

A1:一次可以擴19個片段,有5’-3’外切酶活性。

Q2:跑膠后發現條帶數量比目的條帶數量少。

A2:可能和本身擴增長度有關系,有的條帶之間大小太接近。建議通過重新跑膠看一下能不能區分開條帶,膠濃度2.5%,用80V電壓跑大長膠。

Q3:PM101的擴增產物是平末端還是粘性末端?

A3:粘性末端。

Q4:擴增產物少或沒有擴增。

A4:(1) 確認PCR程序預變性條件為95℃ 5 min,以充分釋放Multiplex DNA Polymerase活性。

(2) 使用高質量的引物,檢查引物是否降解,確認引物濃度為0.1 μM。

(3) 增加PCR循環數。

(4) 降低退火溫度(間隔1-3℃),必要時進行退火溫度梯度嘗試。確認退火時間為90 sec,必要時可延長退火時間至3 min。

(5) 檢查單對引物的擴增性能和特異性。

(6) 擴增子高GC或含有復雜二級結構時,推薦嘗試Multiplex GC Enhancer,添加終濃度為0.5 - 1.0 ×。

(7) 使用高質量的模板;確認DNA模板純度、濃度;增加模板使用量。

(8) 產物過長,重新設計引物。

(9) 延長循環內延伸時間、延長徹底延伸時間。

(10) 提高低產或缺失擴增子引物使用量。

Q5:存在非特異性擴增。

A5:(1) 減少循環數。

(2) 提高退火溫度。

(3) 減少引物使用量。

(4) 重新設計引物。

(5) 擴增子高GC或含有復雜二級結構時,推薦嘗試Multiplex GC Enhancer,添加終濃度為0.5 - 1.0 ×。

Q6:電泳時條帶模糊。

A6:(1) 減少循環數(每次減少3個循環)。

(2) 減少起始模板量。

(3) 延長徹底延伸步驟時間至15 - 30 min。

(4) 降低電泳電壓,更換新的電泳緩沖液。

Q7:跑PAGE膠,有很多彌散條帶,有時候還有微笑條帶。

A7:建議延長延伸時間,降低循環數。

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