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科學研究試劑

高通量測序文庫構建試劑

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  • S702-說明書 V10.1.pdf

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    2020-07-01 00:22:39
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Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN

價格:
5000.0
市場價
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貨號:
S702-01/02
數量:
-
+
庫存:
1998
暫時無貨
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FAQ
組分
說明書

Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN

操作簡單:利用酶切代替超聲破碎,僅需1天即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化

超高活性:DNA片段化活性極高

細胞起始量低:可兼容低至50個細胞

純度高:蛋白純度高、核酸殘留低

應用于CUT&RUN技術

CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術,與后者相比,它具有顯著優勢,如:信噪比高,可重復性好,實驗周期短(1天實現從細胞到文庫構建),細胞投入量低等,因此,該方法適用于表觀遺傳學、腫瘤、干細胞等研究領域。

CUT&RUN技術的實驗流程簡單,主要包括:

1.收集細胞并將細胞與連有伴刀豆蛋白A的磁珠進行結合;

2.孵育一抗;

3.孵育pA/pG-MNase;

4.激活pA/pG-MNase進行片段化;

5.DNA提??;

6.文庫構建。

活性檢測

如圖所示,針對300 ng人源基因組DNA,梯度加入不同量的S701或S702,于37℃進行酶切反應10 min。只需要0.1U 新型融合核酸酶即可實現300 ng人源基因組DNA片段化,表明該融合酶活性很高。

Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN是將Protein G與微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease,MNase)進行融合,形成同時具備Protein G與MNase雙重活性的新型融合酶,專門適用于蛋白質-基因組互作研究的CUT&RUN技術。CUT&RUN技術極大簡化了傳統ChIP-seq的操作流程,僅需1 - 1.5天即可實現從細胞到二代測序文庫構建,且細胞投入量低,信噪比高,可重復性好,廣泛應用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。

組分

S702-01(200 U)

S702-02(400 U)

Hyperactive pG-MNase (10U/μl)

20 μl

40 μl

MNase Dilution Buffer

200 μl

400 μl

于-30 ~ -15℃保存。運輸條件:≤ 0℃。

 

 

 

 

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1: S701與S702如何選擇?

A1:S701試劑盒提供的是Protein A與MNase融合的核酸酶,S702提供的是Protein G與MNase融合的核酸酶,可以直接用于CUT&RUN實驗,具體用量請參考文獻相關操作方案【Skene PJ, et al. (2018) Nat. Protoc 13(5), 1006-1019.】 ;針對大多數抗體,二者均具有廣泛的適用性,但是Protein A對兔來源抗體的親和力相對較高,Protein G對于小鼠等部分哺乳動物抗體的親和力較高,請根據抗體來源種屬與Protein A或者Protein G的親和能力進行選擇。

Q2: CUT&RUN適用于什么物種?

A2:CUT&RUN Protocol廣泛適用于常規哺乳動物細胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等細胞均有文獻報道或相關研究。

 

組分

S702-01(200 U)

S702-02(400 U)

Hyperactive pG-MNase (10U/μl)

20 μl

40 μl

MNase Dilution Buffer

200 μl

400 μl

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