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    2020-09-07 16:24:57
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RoomTemp Sample Lysis Kit

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1000.0
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P073-01/02/03
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組分
說明書

RoomTempTM Sample Lysis Kit

室溫裂解試劑盒

操作簡捷:室溫3min即可,無需復雜模板提取

裂解效率高:裂解試劑與傳統試劑盒提取基因組效果一致。

應用廣泛:兼容Taqman® 探針法的SNP檢測,qPCR探針法定量,PCR擴增等樣本兼容廣:可裂解新鮮血液、凍存血液、常規抗凝劑血液、組織勻漿、口腔拭子、FTA卡等多種樣本

1. 應用銜接—PCR擴增

以常溫裂解液(Vazyme #P073),血液基因組提取試劑盒(Vazyme #DC111),PK裂解試劑盒(Vazyme #PD101)及競品T同時處理的3種抗凝劑全血樣本為模板,使用PCR試劑(Vazyme# P222)分別擴增300bp/500bp/1kb/2kb的4個片段,進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。結果顯示,常溫裂解與試劑盒提取具有同等優異且單一的擴增條帶,優于PK裂解和競品。

圖1. 4種方式處理全血樣本的PCR擴增結果

2. 應用銜接—qPCR探針法定量

以常溫裂解試劑盒(Vazyme #P073)與血液基因組提取試劑盒,PK裂解試劑盒及競品T同時處理的6個抗凝劑全血樣本為模板,使用qPCR試劑(Vazyme #Q811)對3個基因體系進行擴增檢測。結果顯示,△Ct(試劑盒/PK裂解/競品 - 常溫裂解)≥-0.5,常溫裂解具有更優的靈敏度和擴增平臺。

圖2. 4種方式處理全血樣本的?Ct統計結果

 

圖3. 4種方式處理全血樣本的擴增曲線

3. 應用銜接— SNP分型

以常溫裂解試劑盒(Vazyme #P073)與血液基因組提取試劑盒,PK裂解試劑盒及競品T同時處理的18個抗凝劑全血樣本為模板,使用qPCR試劑(Vazyme #Q811)對2個SNP位點(rs3787728、rs4947963)進行分型效果檢測。結果顯示,常溫裂解與其他3種方式處理的樣本均具有一致的良好分型效果。

圖4. 4種方式處理全血樣本的SNP分型結果

RoomTempTM Sample Lysis Kit是一個簡單快速的血液室溫裂解試劑盒。本試劑盒包含Lysis Buffer和Stabilizing Buffer兩個組分,其中Lysis Buffer包含快速破壞細胞膜蛋白及膜結構的特殊組分,可以充分釋放細胞內的基因組DNA,Stabilizing Buffer添加了保護蛋白和穩定因子,可以消除裂解樣本中的抑制因子對下游qPCR和PCR反應的抑制作用,使裂解后的DNA溶液得以長期穩定儲存。適用的血樣類型包括新鮮血液、凍存血液及常規抗凝劑血液(EDTA、枸櫞酸鹽、肝素鈉等)。室溫裂解3 min,即可從全血樣本中釋放基因組DNA。裂解后的DNA溶液可直接作為模板,應用于Taqman® 探針法的SNP檢測,qPCR探針法定量,PCR擴增等。無需繁雜的提取操作,即可達到與傳統基因組提取方法一致的效果。除血液外,本試劑盒也可兼容裂解FTA血卡、口腔拭子、植物組織等多種樣本。

組分

P073-01(250 rxn)

P073-02(1000 rxn)

P073-03(5000 rxn)

Lysis Buffer

5 ml

20 ml

100 ml

Stabilizing Buffer

5 ml

20 ml

100 ml

2 ~ 8℃保存。

未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1.qPCR擴增平臺較低或者PCR產量低?

A1:可能是由于裂解的樣本量較少,或者檢測基因的表達量較低??梢試L試增加裂解的樣本投入量及擴增體系中模板的投入量。以血液為例,Table 1中推薦的裂解液加入量可裂解2 - 10 μl樣本,20 μl擴增體系可兼容1 - 10 μl模板,且對后續qPCR和PCR反應無影響。

Q2. 血液樣本裂解后顏色呈現血紅色?

一般情況下,血液裂解后的溶液為褐色,但個別血液樣本裂解后呈現血紅色,與血液樣本有關,屬于正?,F象,對后續實驗無影響。

Q3. 是否可以只使用Lysis Buffer進行裂解及后續擴增反應?

Stabilizing Buffer中添加了保護蛋白及穩定因子,可以消除裂解樣本中的抑制因子對下游qPCR和PCR反應的抑制作用,使裂解后的DNA溶液得以長期穩定儲存。如果只用Lysis Buffer進行樣本裂解,下游擴增20 μl體系中推薦模板投入量為1 - 2 μl,裂解后的DNA溶液可于-20℃儲存1周。其他情況下不推薦只加入Lysis Buffer裂解。

 

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