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  • P621-說明書-V20.1.pdf

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    2020-12-22 11:19:14
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Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

SingleCellSequenceSpecificAmplificationKit用于單細胞或微量總RNA中轉錄組的擴增適用于1-10000個細胞一步法RT-PCR預擴增最高可擴增500個靶基因擴增產物適合用任何實時熒光定量PCR儀分析高靈敏度，低成本???SingleCellSquenceSpecificAmplificationKit是基于一步RT-PCR的擴增方法，實現單細胞或者微量總RN
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2170.0
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貨號：
P621-01
所屬分類
單細胞預擴增
數量：
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產品詳情
FAQ
組分
說明書

Single Cell Sequence Specific Amplification Kit

用于單細胞或微量總RNA中轉錄組的擴增

適用于1-1000個細胞

一步法RT-PCR預擴增

最高可擴增500個靶基因

擴增產物適合用任何實時熒光定量PCR儀分析

高靈敏度，低成本

Single Cell Squence Specific Amplification Kit 是基于一步RT-PCR的擴增方法，實現單細胞或者微量總RNA中轉錄組的擴增，檢測單個細胞之間不同基因的表達水平。本試劑盒實現了細胞裂解、RNA逆轉錄和PCR反應在同一管內完成，不需要額外的移管操作，具有節約時間、減少實驗誤差、降低污染、提高靈敏度等優勢。

組分 P621-01 (200 rxn)
2 × Reaction Mixa 500 μl
RT/Taq enzymeb 20 μl
Nuclease-free ddH2 O 2 × 1.25 ml

-30 ~ -15℃保存。-20 ~ 0℃運輸。

關鍵詞:
Single Cell Sequence Specific Amplification Kit
P621-01
未找到相應參數組，請于后臺屬性模板中添加

Q1：1.5μl反應體系加入多少樣本的體積？

A1：5μl的反應體系下，加入的樣本體積最好不要超過0.5μl，如果樣本體積較大，建議適當增大反應體系。

Q2：整個體系能否減半？

A2：可以，但是不建議，一步法體系較為復雜，大體系做效果更好。

Q3：真的可以適用于一個細胞的定量嗎？檢測的基因數量最多可以達到多少？會不會造成擴增偏好性？

A3：單細胞是可以的，亦可用于2-1000 cells或10 pg-100 ng RNA的樣品；最多可混合500對不同基因的擴增引物；關于擴增偏好性，只要根據細胞數控制好循環數，不會造成偏好性。

Q4：樣本不是分散開的細胞，而是一小塊組織，可不可以用呢？組織是否可用裂解液進行裂解細胞？

A4：可以的，但是組織塊不能太大，大約有幾十個細胞量的組織塊是可以的，但是超過這個范圍，目前還沒有案例。該產品反應體系只有5μl，不兼容細胞裂解液，大量的裂解液會影響反應的進行，可以將組織進行液氮速凍，直接投入到反應體系即可。

Q5：引物可以使用Oligo dT或隨機引物嗎？

A5：不可以，因為該產品是RNA提取純化、逆轉錄和PCR反應在同一管內完成，如果使用Oligo dT或隨機引物無法達到預擴增的目的。

Q6：引物設計有何要求。

A6：(1) 除了要符合常規的PCR引物設計要求外，還要注意區分外顯子和內含子。

(2) 如果引物池存在2對以上的引物時，退火溫度建議都是60℃左右。

Q7：逆轉錄時間設置為60 min，時間太長，是否可以縮短？退火、延伸這一步驟15 min，循環數20，可以把延伸時間和循環數調節一下？

A7：逆轉錄時間與擴增的基因數目也有關，最保險的是使其進行充分的逆轉錄，60 min可以保證充分逆轉。延伸時間可以根據后期要測試的基因數量進行調節，這里設置的15 min，是為了徹底逆轉500個基因，后續客戶可根據細胞/RNA投入量進行調節；循環數20也是可以根據樣本細胞量進行調節的。

Q8：PCR預擴增結束后的產物先稀釋了5倍，然后再稀釋10倍，為什么要這樣做呢？為什么不一步稀釋到位呢？低豐度，高豐度的基因都是稀釋50倍嗎？

A8：稀釋5倍是作為儲存液，再稀釋10倍作為工作液。稀釋的倍數是可以根據基因的表達量和樣本量進行調整的，所以最好提前做個預實驗判斷一下。

Q9：配置好RT-PreAmp Master Mix后，冰上可以放置多長時間？

A9：放置時間越短越好，我們測試過冰上放置5 min左右沒有問題。

 

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