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VAHTS Library Quantification Kit for Illumina

科學研究試劑

高通量測序文庫構建試劑

藥物研發試劑

  • NQ101-106-說明書-V8.1.pdf

    大?。?/span>
    2020-12-08 17:18:06
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VAHTS Library Quantification Kit for Illumina

VAHTSTMLibraryQuantificationKitforIllumina?Illumina?平臺高通量測序文庫染料法絕對定量專用試劑盒包含絕對定量所有必須組分新型染料法qPCR預混液VAHTSTMSYBR?qPCRMasterMix擴增效率高、GC含量兼容性好標準品定量精準,批次間CV值<5%精心優化的ROX染料濃度,提供ROX預混版本兼容所有主流定量PCR儀???圖1.使用VAHTS
價格:
1600.0
市場價
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貨號:
NQ101/102/103/104
所屬分類
qPCR文庫定量
數量:
-
+
庫存:
9999
暫時無貨
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產品詳情
FAQ
組分
說明書

VAHTS® Library Quantification Kit for Illumina

Illumina平臺高通量測序文庫染料法絕對定量專用試劑盒

包含絕對定量所有必須組分

新型染料法qPCR預混液VAHTS® SYBR qPCR Master Mix

擴增效率高、GC含量兼容性好

標準品定量精準,批次間CV值<5%

精心優化的ROX染料濃度,提供ROX預混版本

兼容所有主流定量PCR儀

圖1. 使用VAHTS® Library Quantification Kit for Illumina繪制的標準曲線。

本品是使用染料qPCR法進行Illumina平臺高通量測序文庫濃度測定的專用試劑盒。其工作原理為使用標準品繪制標準曲線,再根據標準曲線計算待測文庫絕對濃度。試劑盒采用了一種基于抗體法熱啟動的新型染料法qPCR預混液VAHTS® SYBR qPCR Master Mix。該預混液具有特異性高、擴增效率高、 GC含量適應性廣、檢測靈敏度高等諸多優勢,非常適合進行文庫濃度的絕對定量。 試劑盒中提供的所有試劑都經過了嚴格的質量控制,最大程度上保證了不同批次間實驗結果的可重復性。

包裝說明:

1. NQ101、NQ102、NQ103、NQ104為擴增組分試劑盒,包含VAHTS® SYBR qPCR Master Mix、qPCR Primer Mix以及單獨包裝ROX (僅NQ101),包裝量足夠進行500次定量反應(20 μl reaction);NQ105為標準品試劑盒,包含DNA Standard 1-6,包裝量可用于8次標準曲線繪制(3孔重復);NQ106為文庫稀釋液試劑盒,包含50 ml Library Dilution Buffer。

2. 根據反應時ROX Reference Dye是否需要添加及需要添加的種類分類,主流定量PCR儀可分為以下三類:

NQ101試劑盒中提供單獨包裝的ROX Reference Dye 1/2,適用于所有定量PCR儀。使用時根據上表選擇適合的ROX Reference Dye;

NQ102試劑盒中無單獨包裝或預混ROX Reference Dye,適用于上表Type I 機型定量PCR儀;

NQ103試劑盒中的擴增預混液已預混Low ROX (ROX Reference Dye 2),適用于上表Type III 機型定量PCR儀;

NQ104試劑盒中的擴增預混液已預混High ROX (ROX Reference Dye 1),適用于上表Type II 機型定量PCR儀。

所有組分應置于-30 ~ -15℃保存,Master Mix與ROX應避光。于2 ~ 8℃運輸。

關鍵詞:
VAHTSTM Library Quantification Kit for Illumina?
Illumina?平臺高通量測序文庫染料法絕對定量專用試劑盒
NQ111/112/1113/114
未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加

Q1:上機簇密度低該如何解決?

A1:簇密度低可能是由于文庫定量沒有定準確導致上機的文庫量不足導致的,建議重新定量。

Q2:擴增效率偏出90%~110%范圍

A2:(1)如CT (NTC) - CT (DNA Standard 6) < 3或者CT (DNA Standard 6) - CT (DNA Standard 5) < 3.1,且計算擴增效率超過100%,提示反應體系有污染。應根據NTC陰性對照的融解曲線確認污染源(文庫污染或DNA Standards污染)。繪制標準曲線時,應先根據CT (NTC)確定標準曲線有效CT值范圍,舍棄受污染影響的CT,使用剩余的CT繪制。

(2)不恰當的基線設置會增大CT (DNA Standard 1),進而影響擴增效率計算。手動調整基線為1-3循環。

(3)移液精確度差。

Q3:做完標準曲線,發現R2< 0.99,是什么原因?

A3:1)移液精確度差。

(2)所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。

(3)儀器相關問題。確認所用ROX Reference Dye與定量儀器匹配。

Q4:復孔重復性差

A4:(1)移液精確度差。

(2)所有試劑在使用前應充分解凍并徹底混勻。 

(3)儀器相關問題。確認所用ROX Reference Dye與定量儀器匹配。

Q5:DNA Standards有擴增,而文庫沒有或CT很大

A5:1)文庫接頭序列錯誤:建議核對文庫末端序列與試劑盒提供的引物序列是否匹配。 

(2)稀釋度過高:建議減少稀釋倍數,重復實驗。 

(3)文庫降解:文庫應現用現稀釋,稀釋好的文庫應置于冰上備用,用完丟棄。

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VAHTS DNA Clean Beads
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