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NR601-說明書.pdf
大?。?/span>2020-06-30 00:08:57
VAHTS mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina
VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina
常規轉錄組建庫
對于復雜植物模板具有很高的成功率
建庫流程與Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit V2相同
優化的大片段建庫方案
測序數據與Illumina試劑具有高度的一致性
圖1. 選擇1 μg 或100 ng人胚腎上皮細胞HEK293總RNA、水稻幼苗總RNA、桃果實總RNA，用VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina分別構建插入片段大小為200-300 bp或150-200 bp的轉錄組文庫。文庫用Agilent 2100 Bioanalyzer進行分析。
表1. 1 μg 或100 ng universal human reference RNA分別用VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit V2構建文庫。文庫用Qubit定量后，按照相同濃度混樣，用Hiseq 2500測序?？梢钥吹?，用Vazyme試劑盒構建的文庫具有和Illumina非常近似的數據產出和數據質量。
圖2. 1 μg (A)或100 ng (B) universal human reference RNA分別用VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit V2構建文庫，用Hiseq 2500測序，分析數據均一性分布?？梢钥闯?，本產品構建的文庫數據分布均勻，沒有5’或3’偏好性，并且和Illumina試劑盒高度一致。
圖3. 1 μg 或100 ng universal human reference RNA分別用VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit V2構建文庫，用Hiseq 2500測序，兩兩比較表達重復相關性，以spearman相關系數r表示?？梢钥闯?，1 μg (A)、100 ng (B)模板量下Vazyme VAHTS?和Illumina TruSeq之間，以及用Vazyme VAHTS?建庫1 μg和100 ng之間 (C)的相關系數r均大于0.97，說明具有很高的表達重復相關性。
VAHTS? mRNA-seq V2 Library Prep Kit for Illumina適用于起始模板為0.1-1 μg總RNA的Illumina平臺轉錄組文庫構建。本產品的模板適應性廣泛， 對于植物樣本具有很高的建庫成功率。本產品不僅提供與Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit V2相同的建庫流程 (插入片段150-200 bp)，還針對插入片段大于200 bp的文庫提供優化的打斷及分選條件。用本產品構建的文庫在數據產出及數據質量上均與Illumina官方試劑盒保持高度的一致性。
| 組分 | NR601-01（24 rxn) | NR601-02（96 rxn) | |
| NR 1 | mRNA Capture Beads | 1.2 ml | 4.8 ml |
| Beads Binding Buffer | 1.2 ml | 4.8 ml | |
| Beads Wash Buffer | 9.6 ml | 38.4 ml | |
| Tris Buffer | 1.2 ml | 4.8 ml | |
| NR 2 | Frag/Prime Buffer | 468 μl | 2 × 936 μl |
| 1st Strand Buffer | 144 μl | 576 μl | |
| 1st Strand Enzyme Mix | 48 μl | 192 μl | |
| 2nd Strand Buffer | 480 μl | 2 × 960 μl | |
| 2nd Strand Enzyme Mix | 120 μl | 480 μl | |
| NR 3 | End Prep Mix | 960 μl | 4 × 960 μl |
| dA-Tailing Buffer Mix | 240 μl | 960 μl | |
| dA-Tailing Enzyme Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Ligation Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Stop Ligation Mix | 120 μl | 480 μl | |
| PCR Primer Mix | 120 μl | 480 μl | |
| Amplification Mix 1 | 600 μl | 4 × 600 μl |
Box 1： 2-8°C保存。
Box 2 ：-20°C保存。
Box 3 ：-20°C保存。
適用范圍
起始模板：0.1–1 μg完整度良好的總RNA。建議用Agilent 2100 Bioanalyzer對提取的總RNA進行質控，RIN值應≥8。不完整或降解的總RNA模板會給測序結果帶來3’偏好性。
轉錄本信息：本試劑盒適合于針對mRNA的RNA-seq分析，包括：基因表達、單核苷酸變異 (single nucleotide variation)，可變剪切/融合基因、目標轉錄組分析等。如果需要分析非編碼RNA，請選擇VAHTS? Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina (Vazyme #NR603)。
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